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    本發明係有關於一種活性或去活性重組疫苗，包括一病毒載體以及一醫藥上可接受之載體、佐劑、及/或賦型劑，其中，該病毒載體係藉由增加α及/或γ干擾素以產生細胞免疫反應，並具有快速複製的能力，且該病毒載體插入來自PRSS之一核苷酸序列ORF 5以及ORF 6。
    公开号:TW201311899A
    申请号:TW101115990
    申请日:2012-05-04
    公开日:2013-03-16
    发明作者:Bernardo Lozano-Dubernard；Ernesto Soto-Priante；David Sarfati-Mizrahi；Jesus Horacio Lara-Puente
    申请人:Avi Mex S A De C V Lab；
    IPC主号:C12N15-00
    专利说明:
    含病毒載體之抗PRRS重組疫苗
    本發明係關於一種用以預防及控制豬生殖與呼吸綜合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)，特別是關於一種病毒載體重組疫苗與一醫藥上可接受之載體、佐劑及/或賦型劑，其中，該病毒載體重組疫苗係插入有一外源核苷酸序列，該序列可轉譯出對PRRS病毒具有抗原活性之蛋白質。
    豬生殖與呼吸綜合症(PRRS)係一屬於動脈炎病毒科、動脈炎病毒屬之RNA包膜病毒，其尺寸範圍大約460 nm且其病毒基因組包括一正向單股RNA，產生七個開放讀架(open reading frames，ORFs)，ORF 1a、ORF 1b、ORF 2-7，於其中依序產生七個結構蛋白質(gp2a、2b-5、M和N)以及至少十三個非結構蛋白質(nsp 1a、nsp 1b-nsp 12)，每一個蛋白質於形成該vPRRS中皆有其特定功能。此病毒透過選擇性的感染負責啟動免疫反應的單核細胞/巨噬細胞，此外，亦參與引導免疫反應發生，以展現其免疫調節的能力。該病毒已被證實可藉由降低γ干擾素(IFNγ)、延遲產生中和抗體的時間、以及製造免疫誘餌，來改變細胞免疫反應的能力(Yoo et al.,2009；Sang et al.,2009；Patel et al.,2009；Chen et al.,2009；Lalit,2009)。由於vPRRS具有一高度抗原變異性，很難利用以不同免疫接種策略為基礎所使用之傳統方法進行攻擊。因此，全球正努力發展一種足以抵抗該感染的傳播及影響的生物方法，而該病毒的基因操縱產物係實現這一目標的最佳選擇(Lara,2010)。由此觀點，任何能夠提供保護的該病毒次單位的研究正進行中。由於其負責，或者至少部份負責該病毒的致病性，其中ORF 5與ORF 6的使用已經表現出良好的預期結果(Kim et al.,2009；Zuckerman et al.,2007)，證明免疫力可藉由活(複製)病毒，於挑戰過程中獲得保護功能，該保護功能以挑戰後的病毒血症降低程度評量。2005年進行ORF 5突變株的開發，藉由修改其糖基化作用以及將其做為免疫源進行測試，發現該GP5的低糖基化作用，使得該vPRRS於活體內引發中和抗體的能力增加(Ansari et al.,2005)。
    於該ORF 5的特殊情況中，該胺基酸位置1-25之間的區域於美國及歐洲株之間存在有一高度變異區，而於各洲該菌株之高度變異區可歸納於胺基酸26到39之間，靠近該胺基酸序列的尾端。
    ORF 5的序列變化可導致疾病的非典型爆發，如豬流產和死亡綜合症(SAMS)、或是見於中國之高熱綜合症(Ferrari et al,2003；Martelli,2003)。
    目前商品化的抗PRRS疫苗具有一減毒性病毒，然而，該疫苗具有可能感染豬隻的缺點，造成疾病並損其免疫，主要發生於原生動物(native animal)(之前不曾接觸抗原且易感染)。此外，此類疫苗病毒能夠突變且能夠將自己與該流通領域病毒結合，以製造出新的遺傳變異病毒。同樣的，研究指出該活性減毒性疫苗無法完全有效的預防該疾病，同時，先前亦發現該抗vPRRS抗體參與該抗體依賴性增強(ADE)的放大機制，且/或參與vPRRS造成的免疫病理機制(Thanawongnuwech and Suradhat,2010)，因此可能造成與原本預期相反的結果，即使得該接受疫苗的動物更容易受到PRRS疾病感染。
    由於上述情況，亦有多項與對抗此疾病相關的重組疫苗專利。
    美國專利No.7,722,878揭露對抗PRRS的重組疫苗，包含一包括有一vPRRS之ORF1部分的載體，單獨或結合其他ORF。這些疫苗用於引起動物的一免疫反應，且避免以及降低因受vPRRS感染而造成病程加重與產生的症狀。為了要測定這些疫苗的有效性，測量vPRRS的特徵，肺部病變，該疫苗能降低肺部病變達47%。
    美國專利No.5,888,513揭露一自西班牙分離出的vPRRS病毒(相對應於ORF2-ORF7之重組蛋白)，係利用桿狀病毒表達系統製造，且能用於疫苗配方。
    中國專利申請號No.CN1554766A以及CN1800375A描述抗PRRS之重組疫苗，係利用線病毒為一載體，同樣的，中國專利申請號No.CN1778926A揭露一經修改的vPRRS ORF5基因，用於製備對抗該疾病之一疫苗。
    美國專利No.7,041,443，揭露該歐洲型PRRS之病毒、多核苷酸以及多肽，可用於製備免疫原組成物，其成分包含選自許多序列之一多核苷酸在其中之一減毒性及滅毒性vPRRS。
    另一方面，美國專利No.6,207,165，揭露一豬隻多價疫苗配方，係用以對抗參與生殖和/或呼吸道病症之病原體，其中之一即為PRRS。該疫苗包括至少三種疫苗，每一種接包括有一質體以及一具有一豬病原體的基因，於PRRS可為E、ORF3、或M基因。
    最後，美國專利No.5,998,601揭露VR-2332株vPRRS的核苷酸序列，該核苷酸序列能轉譯出ORFs或者其中之片段，以及其衍生之疫苗。
    儘管上述描述之習知疫苗可用以減緩該疾病的影響，惟截至目前為止，尚未有疫苗能夠提供一定程度的保護以對抗vPRRS，進而達到有效控制疾病的目的。
    由於現有技術的一些缺點，本發明之目的在於針對豬生殖與呼吸綜合症(PRRS)提供一種有效的病毒載體重組疫苗。
    本發明之另一目的在於提供一種對抗PRRS的病毒載體重組疫苗，相較於以PRRS全病毒為基礎而製成的疫苗，本發明能夠產生更快速的免疫反應。
    本發明之再一目的在於提供一種使用病毒載體重組疫苗來控制PRRS。
    本發明之又一目的在於提供一種插入一外源序列之病毒載體，其中該外源序列可轉譯出對PRRS病毒具有抗原活性之蛋白質。
    在此，係發明一種重組疫苗，其包含一病毒載體、以及一醫藥可接受之載體、佐劑及/或賦型劑，其中上述之病毒載體能夠藉由增加α及/或γ干擾素，以產生細胞免疫反應，並具有快速複製的能力，較佳係插入具有選自：ORF 5、ORF 6及其組合之PRRS核苷酸之新城疫病毒(Newcastle disease virus)。
    在本發明進行的過程中發現一種重組疫苗，包括一病毒載體以及一醫藥上可接受之載體、佐劑及/或賦型劑，其中，該病毒載體係藉由增加α及/或γ干擾素，以產生細胞免疫反應，並具有快速複製的能力，其中插入有一外源核苷酸序列，轉譯出PRRS病毒抗原位置，可對於豬生殖與呼吸綜合症提供一個合適的保護。
    該病毒載體可為活性(活化)或去活性(死菌)。所謂的去活性係指當作一病毒載體之一重組病毒，其具有該可轉譯出PRRS病毒抗原位置之核苷酸序列，並且失去複製能力。該去活性係藉由習知之物理或化學步驟達成，最佳為藉由甲醛或β-丙內酯進行化學去活性(Office International des Epizooties 2008、新城病、世界動物衛生組織陸生動物診斷試驗和疫苗手冊、以及Office International des Epizooties.France,p.576-589)。相反的，所謂的活性或活病毒即是指該病毒仍然保有其複製的能力。
    較佳為，該病毒載體為一副粘液病毒，係選自由任何副粘液病毒包括弱毒型、中等毒型、及強毒神經型病毒之血清型、基因型或遺傳型之病毒所組成之群組。同樣的，亦可以使用以反向遺傳技術將導致副粘液病毒帶有致病性之117位置苯丙胺酸及靠近Q114位置之鹼性氨基酸移除之病毒，或者一感染鳥類之禽腮腺炎病毒屬(Avulavirus)副粘液病毒，如新城病病毒或仙台病毒。更佳為，該病毒載體為該新城病毒，且該病毒載體係選自由弱毒型或中等毒型所組成之群組之病毒株，譬如樂逤薩(LaSota)、B1、QV4、阿爾斯特(Ulster)、洛津(Roakin)、或是科馬羅夫(Komarov)病毒株，該重組病毒以樂逤薩(LaSota)病毒株為較佳。
    關於該可轉譯出PRRS病毒抗原位置之核苷酸序列，於一些ORFs序列習知技術已有描述，其中可用於製造抗PRRS疫苗的ORF 5與ORF 6，亦於美國專利US5,885,513以及US7,041,443、中國專利CN1778926A有所描述。使用於本發明中之該核苷酸序列係選自由SEQ ID NO：1(ORF 5)、SEQ ID NO：2(ORF 6)、以及其組合所組成之群組。
    本發明之病毒載體疫苗可以透過下列方式製備：利用PCR技術將感興趣的該核苷酸序列放大，接著將已放大的核苷酸序列插入該副粘液病毒載體。其中，插入步驟係以分子生物複製標準技術進行。藉由轉染至一細胞培養以獲得受病毒感染之純系，以製造該重組病毒。
    該病毒於任何適合其生長的系統複製，如SPF雞胚、或商業細胞株、或特別設計用於該病毒生長的細胞株中進行複製，直到該病毒達到足以引起抗原反應所需之濃度，較佳為106.0與1010.0DIEP50%/mL之間，更佳為108.0與109.5DIEP50%/mL之間。於該活菌疫苗實施例中，係使用一弱毒性活菌疫苗或一經過習知步驟減毒之病毒疫苗。另一方面，當該疫苗被去活性，即使達到足以引起抗原反應所需之病毒濃度，則該病毒仍為去活性。更佳為，該去活性步驟係以習知之物理或化學步驟，而又以甲醛、β-丙內酯、或二乙烯亞胺(B.E.I.)之化學去活性方法為佳。
    於本發明疫苗之醫藥上可接受之載體，較佳為水溶液或乳狀液，尤其是該媒介為一水-油、油-水、或水-油-水(WOW)乳狀液，較佳為一水-油-水乳狀液。依據該疫苗施予方式，於每一種情況下選擇對豬隻最適合的手段及方式，並且依據該疫苗為活性或去活性疫苗，可透過肌肉注射路徑、鼻腔內路徑、或皮下路徑，以噴繞法、噴塗法或置於飲用水中實施。較佳的給藥方式為肌肉注射或鼻腔內路徑，而更佳為透過肌肉注射。
    透過下述示範例說明，使本發明更好理解，其目的僅為了說明本發明較佳的示範例，俾以幫助理解，並非僅限於上述形容之實施方式。 示範例1
    新城病病毒樂逤薩(LaSota)載體的製造
    為了要複製該新城病毒的基因組、樂逤薩(LaSota)病毒株並且據以製造一病毒載體，首先，建立一個中間載體，稱為”pSL1180NDV/LS”。為此，利用三唑(Triazole)方法，進行新城病病毒樂逤薩(LaSota)病毒株全病毒RNA萃取。以純化的RNA當作一模板，進行該病毒基因組的cDNA(互補DNA)合成。為了將該新城病病毒的所有基因進行複製(15，183鹼基對(bp))，七個具有重疊端，且帶有相同黏合端子限制酶切位之片段以PCR技術放大。片段1(F1)包括核苷酸(nt)1-1755、F2則是由nt 1-3321、F3包括nt 1755-6580、F4由nt 6,151-10,210、F5由nt 7,381-11,351、F6由nt 11,351-14,995、且F7由nt 14,701-15,186。該組裝的七個片段以標準連接方法組合於一稱為”pGEM-pSL1180”的複製載體之中，可允許該新城病病毒樂逤薩(LaSota)基因組重建。該重建後的純系於P與M基因之間有一單一限制酶切位SacII，以便於複製任何感興趣的基因至該位於病毒載體的區域。 示範例2
    自vPRRS複製該ORF 5以及ORF 6基因
    為了自vPRRS複製該ORF 5以及ORF 6基因，全病毒RNA以三唑(Triazole)方法進行萃取。此純化的全RNA係用來合成該cDNA(互補DNA)，且透過該PCR技術，藉由特定的核苷酸對該PRRS病毒基因進行放大。利用標準複製技術，將ORF 5以及ORF 6基因插入進階(Fermentas)公司的pJET載體，以得到pJETORF5/ORF6質體。 示範例3
    複製來自vPRRS之ORF 5以及ORF 6基因至pSL1180NDV/LS載體SacII位置以製造pNDV-LS(wt)Orf5/6質體
    A.製造plntNhe中間載體
    為了引入該新城病病毒ORF 5以及ORF 6基因的5’端稱為GE/GS的轉錄序列，藉由PCR初步放大該GE/GS序列，並以該新城病基因組當作一模板，並且將上述序列插入pGEM-T，以建立一新的中間載體，稱為plntNhe。
    B.次選殖該ORF 5以及ORF 6基因至plntNhe載體
    該plntNhe質體以SpeI-Hpal進行切割反應，接著選殖至該plntNhe以獲得該plnt Nhe 56質體。
    C.次選殖GE/GS-ORF5/6至載體pSL1180NDV/LS
    該pINTNhe 56質體以Nhel酵素進行切割反應，並且將該pSL1180NDV/LS質體以SacII酵素進行切割反應，將切割反應完成後的產物剔除，以留下相容的連接位置。該GE/GS-ORF5/6區域純化並且插入pNDV/LS的SacII位置，以獲得該稱為pNDV-LS(wt)Orf5/6的受感染的純系。 示範例4
    於細胞培養製造重組病毒rNDV-LS(wt)Orf5/6
    首先將Hep-2與A-549細胞以MAV-7病毒轉染，其中病毒感染劑量(MOI)為1。於37℃、5% CO2的環境下培養一小時後，該細胞以1微克的(μg)pNDV-LS(wt)Orf5/6純系DNA、以及0.2 μg的表現質體pNP、pP、以及pLDNA轉染，其中該表現質體pNP、pP、以及pL編碼成病毒蛋白NP、P、L，對於該兩種細胞而言，均為製造該重組體所必須的蛋白質。於轉染過後四十四小時，搜集該獲得重組病毒的細胞株，並且注入至10天大的SPF雞胚胎以放大該產生的病毒。該收集的尿囊液於Vero細胞中進行樣品盤測試(plate assay)測定濃度，從而搜集最終的該重組病毒，以製備該疫苗。 示範例5
    具有來自vPRRS之ORF 5、ORF 6插入子插入之新城病樂逤薩(LaSota)重組病毒疫苗製造方法
    首先，將無特定病原(SPF)雞胚與預定感染劑量之病毒共培養。該胚胎在37℃培養72小時，並每日監測死亡率。同時，存活的胚胎冷藏至隔日，最佳為24小時，該胺基酸尿囊液(FAA，西班牙文的縮寫)在無菌條件下離心以澄清之，該FAA係用於測試其純度、無菌、以及DIEP效價。
    該活性以及去活性疫苗製備於一水-油-水乳狀液中。為了要製備該油相層，使用礦物油以及Span 80與Tween 80類介面活性劑。為了要製備該水層，該FAA混合一保存液(硫柳汞)。製備該乳狀液，該水相緩慢的加入至該油相並且不斷攪拌，一均質機或一膠體磨亦用來幫助達到特定顆粒尺寸。
    上述疫苗係給予一最小108.0DIEP50%/0.5mL的配方，每頭豬隻使用的劑量為2.0mL。
    根據上述方法，一重組實驗性疫苗係製造於一具有ORF 5以及ORF 6基因之載體(pSL1180 NDV/LS)，稱為pNDV-LS(wt)/Orf5/6 vec，以活菌形式不添加佐劑測試(示範例5A)，活菌形式添加一水-油-水佐劑(示範例5B)、以及一去活性形式添加一水-油-水佐劑(示範例5C)，以兩種劑量施予所有示例。 示範例6
    活體內評估該重組疫苗pDNV-LS(wt)/Orf5/6 vac效力
    為了確定本發明疫苗的效力以及顯示其具有較商品化疫苗(以1劑量施予)更佳的功效，故進行功效測試。
    使用PRRS病原體活病毒，於一劑量106.0DICC50%mL/45分鐘，於不同實驗中挑戰之以測定該疫苗的功效。
    為此，根據表1，利用3至5周大的104隻SPF豬隻，其耳朵個別以數字標記，二重複進行，秤重並且隨機分配至9處理組。

    該豬隻圈養於有負壓之獨立空間，並於處理前給予三天環境適應期。所有組別的動物皆餵食已商品化的食品，且以居家用水當作飲用水，隨意食用。食物與飲用水皆不額外加入添加物且/或抗生素。同樣的，每個空間皆有空氣過濾系統並且將空氣密封於各自房間內。該豬隻於第0天以及第14天根據示範例5A-5C以本發明之疫苗進行免疫接種(pNDV-LS(wt)/Orf5/6 vac)，且每頭豬隻施予2.0mL劑量。為求比較，另一組以一般用於抗PRRS之商品化疫苗(Ingelvac® PRRS MLV)，每頭豬隻以2.0mL劑量(廠商建議)進行免疫接種。
    該疫苗接種當日定為「接種後第0天」(DPV 0)。同樣的，於DPV 0、DPV 7、DPV 14、DPV 21、DPV 28、DPV 35、DPV 42、以及DPV 49(犧牲)，利用腔靜脈穿刺方法於各組動物取得血液樣本。
    該挑戰測試於DPV 35(DPDF 0)展開，實施於除了陰性對照組之外的所有組別豬隻上。該挑戰病毒係於一特別為豬隻設計之空間以噴塗法施予。在DPV 49或DPDF 14，所有豬隻皆犧牲並進行解剖。為了證明疫苗的功效，對其生長情況和接種後豬隻肺部病變比例進行評估。
    肺部病變比例
    不同組別的豬隻於DPDF 14以電撃、放血方式犧牲，隨後進行解剖，摘除腹腔內仍連接氣管的肺部。評估項目包括左右尖葉、左右心葉、左顱邊緣以及右隔葉與中葉。組織樣本根據受傷的有無，收集自受影響的器官。以面積方法測定(Ciprián et al,.1988,Lara et al,2008)因vPRRS感染造成的宏觀傷害(定義為一區域具有發生間質性肺炎可能)，其結果如表1所示。
    由表可見施予該疫苗pNDV-LS(wt)Orf5/6 vac的不同變體(活疫苗、活疫苗與佐劑、以及滅毒性疫苗與佐劑)，與陽性對照組相比，該類疫苗可降低肺部病變比例高達67%，而當使用商業性疫苗，該肺部病變增加約30%。此結果與先前揭露之習知相符(Thanawongnuwech and Suradhat,2010)。
    血清學
    血液樣本從所有組別的豬隻取得以進行血清學測試。比較自這些樣本相對應的基礎樣本抽樣、挑戰測試之前的樣本、以及犧牲當日的樣本。以IDEXX公司之ELISA Herd根據廠商建議方法進行血清轉化(seroconversion)測試。其結果如下所示：
    上述結果顯示，一如預期於所有SPF豬的基礎抽樣結果皆為陰性。挑戰試驗時，血清轉化的唯一組為以Ingelvac PRRS MLV免疫接種的組別，而接受本發明疫苗免疫接種的組別皆無血清轉化發生。此結果係因商業的ELISA試劑組僅能偵測抗ORF 7轉譯之核衣殼蛋白抗體，而該抗體並未出現於任何示範例5A-5C之中。
    於犧牲的樣本可見該接受商品化疫苗免疫接種的組別依然顯現血清陽性，而其他組別為血清陰性，係因為挑戰測試與犧牲的時間點間隔較短，該時間不足以使挑戰測試的病毒造成血清轉化。然而，於PCR測試中的確可以在所有挑戰測試樣本偵測到病毒的存在。
    同樣的，為了偵測pNDV-LS(wt)Orf5/6 vac於不同實施例的血清轉化，利用該上述之血清樣本，以習知方法進行該HI測試，結果如表3所示。
    如表所見，該SPF豬隻最初於不同實施例中(E5A-E5C)對於pNDV-LS(wt)Orf5/6 vac疫苗測試皆為陰性。然而，在挑戰測試前，接種本發明之疫苗組別已完全經過血清轉化，即100%接種的動物根據所施行之處理產生不同的抗體皆為血清陽性，然而，該陰性對照組、陽性對照組、以及該接種商品化疫苗的組別仍然是血清陰性。於犧牲的時間點樣本亦有同樣的趨勢，亦即，該接種pNDV-LS(wt)Orf5/6 vac疫苗的組別於100%的動物中保有100%的血清轉換，然而其他的組別仍然顯示陰性。
    上述顯示一選自藉由增加α及/或γ干擾素以產生細胞免疫反應，並具有快速複製的能力之病毒載體的功效，用以製造一有效的疫苗。
    生長情況
    為了證明豬隻仍持續生長，該豬隻於一開始即個別秤重，並於實驗過程中、研究結束後解剖時均持續追蹤。如圖1所示，與該商品化疫苗相比。該接種示範例5C疫苗的豬隻體重(w)些微增加(pNDV-LS(wt)Orf5/6 vac去活性疫苗與佐劑)。
    另一方面，由於該豬隻接種活菌疫苗(圖2)，可見接種該pNDV-LS(wt)Orf5/6 vac疫苗，無論是否添家佐劑，接種動物的體重相較於接種商品化疫苗組別皆有增加。
    這些實驗展現出本發明疫苗於血清轉化較商業化疫苗更具時間優勢，進而達到更佳的防護等級，此功效可透過觀察豬隻肺部病變比例明顯下降得知，確認了本發明的成功。產生的參數相較於未接種動物，已可見其明顯進步。同樣的，產生一可測量的血清反應，此血清反應不同於該領域病源病毒所製造、或該因為存在的商品化活菌疫苗而引起的反應，換句話說，本發明之該重組疫苗滿足DIVA參數(分化自接種動物感染的病毒)。
    上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明並不受限於此，如以病毒當作病毒載體、或者乳狀液或載體種類的使用重點在於，只要不悖離本發明之權利請求範圍之任何可能的修改，亦符合本發明。
    本發明之特徵及新穎性態樣特別確立在所附的專利申請範圍。然而，其中之一些實施例、特色、以及目的與優點，於透過所附之圖示以及詳細的描述更能幫助理解，其中：
    圖1係相較於商業疫苗，顯示接種本發明去活性PRRS疫苗的豬隻之體重增加。
    圖2係相較於商業疫苗，顯示接種本發明活性PRRS疫苗的豬隻之體重增加。
    <110> 申請人：AVI-MEX實驗室公司
    <120> 發明名稱：含病毒載體之抗PRRS重組疫苗/RECOMBINANT VACCINE IN VIRAL VECTOR AGAINST PRRS
    <160> 2
    <170> PATENT-IN 3.5
    <210> 1
    <211> 長度：600
    <212> 類型：DNA
    <213> 豬生殖與呼吸綜合症
    <400> 1
    <210> 2
    <211> 長度：420
    <212> 類型：DNA
    <213> 豬生殖與呼吸綜合症
    <400> 2
    权利要求:
    Claims (26)
    [1] 一種病毒載體，係藉由增加α及/或γ干擾素以產生細胞免疫反應，並具有快速複製的能力，其中該病毒載體係插入有一轉譯出對抗PRSS病毒抗原活性之外源核苷酸序列。
    [2] 如申請專利範圍第1項所述之病毒載體，其中該病毒係為一副粘液病毒。
    [3] 如申請專利範圍第2項所述之病毒載體，其中該副粘液病毒係選自由任何包括弱毒型、中等毒型、及強毒神經型病毒之血清型、基因型或遺傳型之病毒所組成之群組；以反向遺傳技術將導致副粘液病毒帶有致病性之117位置苯丙胺酸及靠近Q114位置之鹼性氨基酸移除之病毒；或感染鳥類之禽腮腺炎病毒屬(Avulavirus)副粘液病毒。
    [4] 如申請專利範圍第3項所述之病毒載體，其中該副粘液病毒係選自由新城病病毒(Newcastle disease virus)及仙台病毒(Sendai virus)所組成之群組。
    [5] 如申請專利範圍第4項所述之病毒載體，其中該副粘液病毒為該新城病病毒。
    [6] 如申請專利範圍第5項所述之病毒載體，其中該新城病病毒係選自由樂逤薩(LaSota)、B1、QV4、阿爾斯特(Ulster)、洛津(Roakin)以及科馬羅夫(Komarov)病毒株所組成之群組。
    [7] 如申請專利範圍第5項所述之病毒載體，其中該外源核苷酸序列係選自由ORF5、ORF6以及其組合所組成之群組。
    [8] 如申請專利範圍第7項所述之病毒載體，其中該ORF5有SEQ ID NO：1之序列且ORF6有SEQ ID NO：2之序列。
    [9] 一種重組疫苗，其中包括一病毒載體、一醫藥上可接受之載體、佐劑及/或賦型劑，其中，該病毒載體係藉由增加α及/或γ干擾素以產生細胞免疫反應，並具有快速複製的能力，其中該病毒載體係插入有一轉譯出對抗PRSS病毒抗原活性之外源核苷酸序列。
    [10] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，其中該病毒係為一副粘液病毒。
    [11] 如申請專利範圍第10項所述之重組疫苗，其中該副粘液病毒為活性或去活性病毒。
    [12] 如申請專利範圍第11項所述之重組疫苗，其中該副粘液病毒係選自由任何包括弱毒型、中等毒型、及強毒神經型病毒之血清型、基因型或遺傳型之病毒所組成之群組；以反向遺傳技術將導致副粘液病毒帶有致病性之117位置苯丙胺酸及靠近Q114位置之鹼性氨基酸移除之病毒；或感染鳥類之禽腮腺炎病毒屬(Avulavirus)副粘液病毒。
    [13] 如申請專利範圍第12項所述之重組疫苗，其中該副粘液病毒係選自由新城病病毒(Newcastle disease virus)及仙台病毒(Sendai virus)所組成之群組。
    [14] 如申請專利範圍第13項所述之重組疫苗，其中該副粘液病毒為新城病病毒。
    [15] 如申請專利範圍第14項所述之重組疫苗，其中該新城病病毒係選自由樂逤薩(LaSota)、B1、QV4、阿爾斯特(Ulster)、洛津(Roakin)以及科馬羅夫(Komarov)病毒株所組成之群組。
    [16] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，其中該外源核苷酸序列係選自由ORF5、ORF6以及上述之結合所組成之群組。
    [17] 如申請專利範圍第16項所述之重組疫苗，其中該ORF5有SEQ ID NO：1之序列且ORF6有SEQ ID NO：2之序列。
    [18] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，其中於該藥學許可媒介物較佳為水溶液或乳狀液。
    [19] 如申請專利範圍第18項所述之重組疫苗，其中該藥學許可媒介物係選自於水-油、油-水、或水-油-水乳膠。
    [20] 如申請專利範圍第19項所述之重組疫苗，其中該藥學許可媒介物更為一水-油-水乳膠。
    [21] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，其中該病毒濃度係為引起抗原反應之106.0和1010.0DIEP50%/mL之間。
    [22] 如申請專利範圍第21項所述之重組疫苗，其中該病毒濃度更為引起抗原反應之108.0和109.5DIEP50%/mL之間。
    [23] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，其中，其給藥方式係透過肌肉注射路徑、鼻腔內路徑、或皮下路徑，以噴繞法、噴塗法或置於飲用水中實施。
    [24] 如申請專利範圍第23項所述之重組疫苗，其中該給藥方式係為肌肉注射途徑。
    [25] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，係用於控制豬生殖與呼吸綜合症(PRRS)。
    [26] 如申請專利範圍第9項所述之重組疫苗，係用於控制豬生殖與呼吸綜合症(PRRS)，其中該免疫動物施打兩劑量疫苗後肺部病變係低於12%。
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